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原代细胞培养
特殊染色

时间:2021-03-04 浏览:998次


特殊染色

为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等,需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。包括:胶原纤维染色(Masson等)、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色(磷钨酸苏木素)、脂肪染色(苏丹III)、糖原染色(PAS)、粘液染色(PAS)等。

Masson染色

Masson染色是指用两种或三种阴离子染料混合,胶原纤维呈蓝色,肌纤维呈红色。用来显示组织中纤维以及炎性因子的染色方法之一,色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

PAS染色(糖原染色)

主要用来检测组织中的糖类。全称为过碘酸雪夫氏染色(schiff periodic acid shiffPAS),又称糖原染色,其原理为过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合,变为红色,定位于胞浆上,在组织学上, PAS染色应用范围广泛:鉴别细胞内空泡状性质、心肌病变及其他心血管疾病的诊断、糖原累积病诊断和研究、糖尿病诊断和研究,除用于糖原的鉴定和黏液的显示外,还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。

番红-固绿染色

番红-固绿染色(植物染色)适用于高等植物根、茎、叶的染色。番红是碱性染料能显示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织。固绿是酸性染料,是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂。导管可以被番红染色,筛管可以被固绿染色。

番红-固绿染色(软骨)的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红结合呈现红色,嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色,与呈现红色的软骨对比鲜明,从而将软骨组织和骨组织区分开。

油红OOil Red O)染色

油红O是一种脂溶性偶氮染料,是很强的脂溶剂和染脂剂,能特异性地使组织和细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等染色。当组织切片置入染液时,染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂滴呈红色。用于分析细胞样品中脂质状况。注意:油红O染色只能适用于冰冻切片或新鲜组织。

苏丹Ⅲ染色

脂肪和苏丹染液有比较强的亲和力,主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着。需用冰冻切片,染色后脂肪呈猩红色,细胞核呈蓝色。

姬姆萨染色

姬姆萨染是由天青与伊红组成。各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,被染成粉红色;嗜碱性颗粒如细胞核蛋白或淋巴细胞胞浆为酸性物质,与碱性染料美蓝或天青结合,被染成紫蓝色;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,呈淡紫色。

甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)

甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,为碱性染料,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测,例如色素性荨麻疹

天狼星红染色

由于胶原呈碱性,与酸性染料起强烈反应。天狼星红就是一种很强的酸性染料,它可以和胶原纤维反应使胶原纤维产生明显的双折光现象。天狼星红染色胶原纤维呈红色,胞核呈绿色,余呈黄色。偏光显微镜可以分辨不同的纤维类型。

基底膜六胺银染色

基底膜六胺银染色是一种经典显示基底膜的方法。组织经过碘酸氧化,使基底膜内的黏多糖暴露出醛基,醛基把六胺银还原为黑色的金属银。氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金,同时使背景更清晰。六胺银染色能清晰地显示基底膜,在肾病变中应用最多,常用来观察肾小球毛细血管基底膜在炎性损伤时如断裂、增生、折叠等形态改变。

尼氏染色

神经细胞内都含有尼氏体,但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体也存在于树突中,但不在于轴突和胞体的轴丘。尼氏体会因为生理状态的变化而变化,尼氏体是神经元内合成蛋白质合成的重要部位,当神经元受到刺激后,胞体内的尼氏体会明显减少。通常尼氏体能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。

普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction

普鲁士蓝反应又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁氰化钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞内会间质内,主要显示三价铁盐。Perls普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应,是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法,其染色原理为:亚铁氰化钾溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来,三价铁与亚铁氰化钾反应,生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝,所以该反应被称为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物,在反应后可用红色染色剂进行复染,如核固红、伊红、中性红等。

Perls stain常用于显示局部组织内各种出血性病变,常见于吞噬细胞内。在判断含铁血黄素沉积时,用Perls反应可以得到证实,该染色方法可以很好的区分含铁血黄素和其他色素。该染色液稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进行复染。该染色液的复染液采用核固红,是最经典、最常用的复染液。

β-半乳糖苷酶染色(β-Galactosidase Staining )

β-半乳糖苷酶染色是一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测,也可以用于组织切片的衰老检测。β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物,光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒仅染色衰老细胞,对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。对于组织切片或组织块,可以检测的样品数量视样品的大小而定,对于普通的切片也至少足够检测100个样品,使用6孔板测定,足够测定100个样品。

Von Kossa染色

钙在人体内大量存在,构成骨骼作为支持人体的支架,在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用。许多染料可以于钙形成螯合物,包括茜素红S、红紫素、核固红等。茜素红S属一种蒽醌类衍生物,是茜素磺酸钠盐,它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红S法,本产品原理在于该法是一种金属置换法,硝酸银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时,钙被银所置换,银盐在光的作用下被还原为黑色金属银,适用于大量样本的钙盐组织染色


    部分结果展示


                         油红O染色                                                                                        ALP染色


                                茜红素染色                                                                                      LFB染色


                              天狼星红染色                                                                                      masson染色


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