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原代细胞培养
HE染色

时间:2021-03-04 浏览:1688次

HE染色(hematoxylin-eosin staining

HE 染色:又称苏木素-伊红染色法,其中苏木素是Hematoxylin,简称H,伊红是Eosin, 简 称EHE 染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。 这种方法对组织细胞的各种成分都可着色,经过 HE 染色,细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉红色。苏木素是碱性染料,蓝紫色,可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性,具有嗜碱性(Basophilic)。伊红是酸性染料,粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性,具有嗜酸性(Acidophilic)

HE染色法过程:

1脱蜡

1.1从温箱中取出烤干的切片,立即投入二甲苯中脱蜡510min(可在二瓶中进行),脱蜡时间长短取决于蜡是不彻底溶解。气温低可延长时间,气温高可适当缩短时间或在温箱中加速脱蜡。

1.2移入无水酒精(100%)(二瓶),2min

1.3移入90%酒精中(二瓶),2min

1.4移入80%酒精中(二瓶),2min

1.5移入70%酒精中,2min

1.6移入水中,洗去酒精,23min

1.7移入蒸馏水中,2min

2染色

2.1移入苏木素中,浸染5min,一般以稍深染为宜。

2.2移入水中,洗去苏木素和浮色,1min

2.3移入分化液(1%盐酸酒精),分化几秒至30秒钟, 使切片褪色至淡兰红色即可。分化的作用,可使细胞浆兰色脱去,而细胞核更加清晰,鲜丽,分化不足时,胞浆带兰,胞核过染,分化过度时,胞核太淡,难以辩认,可再退回苏木素染液, 延长一定时间。

2.4移入流水中,洗涤3060min,使组织呈鲜兰色或天兰色(兰化)

2.5移入伊红液中,浸染25min,如着染缓慢 , 可在伊红液中加入冰醋酸 (100ml伊红液加12滴冰醋酸)以助染。

2.6移入水中,洗去伊红浮液,并用纱布擦净玻片上的多余染料。

3脱水

3.1吸去玻片上的水分后多入80%酒精中,(二瓶)脱水,12min, 如在酒精中褪色很快时,可迅速移入90%酒精或返回伊红液中复染。

3.2移入90%酒精中(二瓶)脱水,24min

3.3移入无水酒精(100%酒精)(二瓶)彻底脱水,48min

4透明

4.1移入二甲苯Ⅰ中透明35min

4.2移入二甲苯Ⅱ中透明510min

5封固

用树胶封固,先从二甲苯Ⅱ中取出切片,将组织外围的二甲苯迅速擦去,在滴上一滴树胶于组织片上,然后取干净的盖玻片,仔细加在封固剂上,慢慢压平, 使盖片位置适中。切片封固后,放在温箱中烤干,或平置凉干后装盒。

注意事项

切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。

结果展示:

结果:细胞核呈蓝色,细胞质,肌纤维,胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和 细菌可呈蓝色或紫蓝色。

粘虫Mythimna separata 肠道HE染色(200X)



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