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原代细胞培养
细胞划痕实验

时间:2019-03-08 浏览:540次

细胞划痕实验

一、实验简介

细胞划痕(修复)法是一种简捷的测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央的细胞,然后继续培养细胞至设定时间(采用无血清或低血清(<2%)排除细胞增殖的影响),取出培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力。通常设定正常对照组与实验组,实验组中添加某些处理因素或药物、外源性基因等,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,判断比较各组细胞的迁移与修复能力。


二、细胞划痕实验步骤

(1) 先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。   

(2) 在孔中加入约5×105个细胞,培养细胞至汇合度达到90%以上。  

(3) 用头比着直尺,垂直于背后的横线划痕。  

(4) PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基。

(5) 放入37℃ 5% CO2培养箱培养。按0122448h时间点取样,100倍镜下拍照。如果细胞迁移(修复)能力较强,需相应缩短观察时间间隔。

(6) 结果分析:对不同时间点不同处理分组的划痕间距进行分析。





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